| 品牌 | 弦華生物 | 產地類別 | 國產 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 綜合 |
弦華生物T7 RNA 體外轉錄試劑盒
貨號:EB0011
英文名稱:T7 RNA Transcription Kit
產品規格:10T 50T 100T
【產品介紹】
T7 RNA Polymerase是一種源自T7噬菌體的酶，它是一種DNA依賴的RNA聚合酶，具有高度的特異性，僅識別T7啟動子序列。這種酶在分子生物學研究中扮演著重要角色，尤其是在體外轉錄和基因表達分析中。T7 RNA Polymerase能夠從含有T7啟動子的模板DNA高效合成RNA，其轉錄活性不受真核細胞內RNA聚合酶II的啟動子或增強子的影響，因此可以用于精確控制RNA的合成。此外，T7 RNA Polymerase在轉錄過程中對模板DNA的親和力高，能夠在較低的酶濃度下實現高效的轉錄，這使得它在高通量實驗中尤為有用。
【試劑盒組成】
組分 | 10次 | 50次 | 100次 |
5*T7 RNA Polymerase Buffer | 40 μl | 200 μl | 400 μl |
ATP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
CTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
GTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
UTP Solution | 15 μl | 75 μl | 150 μl |
EnzymeMix | 5 μl | 100 μl | 150 μl |
RNase Inhibitor | 5 μl | 25 μl | 50 μl |
RNase-free ddH2O | 100 μl | 500 μl | 1000 μl |
Control DNA | 2 μL (500 ng/μl) | 5 μL (500 ng/μl) | 10 μL (500 ng/μl) |
【注意事項】（操作前仔細閱讀）
1．用于RNA合成的器具須用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液37°C浸泡12 h；然后在121°C高壓滅菌20 min去除殘留的DEPC。
2．請使用不含RNA和DNA酶的槍頭、離心管進行實驗。
3．RNA聚合酶和RNA酶抑制劑避免反復凍融；放置冰上后請盡快使用。
4．實驗時請佩戴一次性手套及口罩以避免產物被RNase降解
5．轉錄前請先電泳確定模板為單一片段或模板純度＞90%。
6．進行體外轉錄合成 RNA 時，本產品不僅適用于含有 T7 promoter 的線性plasmid，也適用于帶有 T7 promoter序列的PCR 產物、oligo DNA等。
7．如遇轉錄效果不佳，可自行多加RNase Inhibitor或對 EnzymeMix 稀釋2-4倍使用，（注:試劑盒中帶有陽性對照轉錄模板，加入量為1μl/20μl體系）。
8．本產品僅供科研使用。
【標準轉錄步驟】
1．將除EnzymeMix和RNase Inhibitor 外的組分振蕩混勻，短暫離心收集于管底，冰上儲存備用。
2．將四種核苷酸分子等比例配成rNTPs預混液。配置好的預混液可在-20℃放置2個月。
3．按下表配制反應體系（也可根據實驗需求按照此加入配比等比例擴大或縮小總體系），建議模板加入0.1-1 μg（注：加入各轉錄組分時請最后加入轉錄模板）。
組分 | 體積（μl） |
5*T7 RNA Polymerase Buffer | 4 |
rNTPs | 6 |
EnzymeMix | 2 |
RNase Inhibitor | 0.5 |
Template DNA | X μl（0.1-1 μg） |
RNase-free ddH2O | up to 20 μl |
4．用移液器輕輕混勻各組分，并短暫離心收集，37°C孵育3 h。
【存儲及保存】
存儲緩沖液：20 mM pottasium phosphate buffer, 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA,1 mM DTT, 50% (v/v) glycerol, pH 7.5 25oC。
T7 RNA Polymerase Buffer (5*)：600 mM HEPES-KOH(pH7.6), 120 mM MgCl2, 200 mM DTT, 10 mM spermidine。
弦華生物T7 RNA 體外轉錄試劑盒【存放說明】
-20oC保存，至少一年有效。可以分裝后在-80oC長期保存。
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